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                血清中類固醇激素的檢測-Cleanert SLE
                發布日期:2019-03-29

                ?類固醇激素又稱為甾體激素,是內分泌細胞分泌的高效能生物化學物質。它們在維持生命、調節機體物質代謝、促進性器官發育和維持生育等方面起著重要作用。

                類固醇激素在體內的含量較低,對其準確定量具有重要意義。本實驗采用Cleanert SLE對血清樣品進行凈化,建立了血清中類固醇激素的檢測方法,可為臨床研究提供參考。

                目標物信息

                表1 目標物結構信息

                名稱

                CAS

                結構

                可的松

                53-06-5

                血清中類固醇激素的檢測-Cleanert SLE

                黃體酮

                57-83-0

                血清中類固醇激素的檢測-Cleanert SLE

                睪酮

                58-22-0

                勃地酮

                846-48-0

                材料

                Cleanert SLE (200mg/3mL);Cleanert M96 生物樣品前處理儀;Cleanert V96 氮吹濃縮儀;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 ?);API 4000+。

                樣品處理方法

                移取200μL血清樣品至樣品管中,并加入一定體積的甲醇,使溶液中甲醇的含量為5%,搖勻待凈化。

                將經過預處理的血清樣品上樣至Cleanert SLE中,可開啟負壓裝置(真空度<-0.04MPa)將樣品抽過上篩板或使用Cleanert M96 生物樣品前處理儀將樣品壓下篩板,待樣品全部流至填料中后,靜止10min。

                在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目標物的洗脫,控制洗脫速度為1~2mL/min,在第一次洗脫完成之后,間隔1min再進行第二次洗脫,合并洗脫液。

                將合并的洗脫液用96位氮吹儀進行氮吹濃縮,溫度設定為40℃,氮吹至近干。

                使用200μL乙腈/水(3/7,v/v)將樣品進行重溶,搖勻,進樣檢測。

                儀器檢測條件

                正模式方法(針對黃體酮、睪酮、勃地酮)

                HPLC條件

                色譜柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 ?)

                流速:200μL/min

                柱溫:30℃

                進樣量:5μL

                流動相:水/乙腈(45/55,v/v)

                質譜條件

                掃描模式:電噴霧電離正模式

                采集模式:多反應監測(MRM)

                表2 質譜參數

                ID

                保留時間/min

                Q1

                Q3

                DP

                CE

                勃地酮

                1.66

                287.3

                121.3

                110

                30

                287.3

                135.3

                109

                24

                睪酮

                1.95

                289.3

                97.1

                114

                30

                289.3

                109.2

                115

                36

                黃體酮

                4.16

                315.4

                97.1

                95

                35

                315.4

                109.1

                95

                39

                負模式方法(針對可的松)

                HPLC條件

                色譜柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 ?)

                流速:200μL/min

                柱溫:30℃

                進樣量:5μL

                流動相:水/乙腈(70/30,v/v)

                質譜條件

                掃描模式:電噴霧電離負模式

                采集模式:多反應監測(MRM)

                表3 質譜參數

                ID

                保留時間/min

                Q1

                Q3

                DP

                CE

                可的松

                 

                2.55

                405.3

                359

                -60

                -12

                405.3

                328.8

                -40

                -18

                405.3

                300.9

                -55

                -26

                結果

                表4 數據結果

                化合物

                加標回收率-1

                加標回收率-2

                LOD/ng/mL

                黃體酮

                67.90%

                63.48%

                0.15

                睪酮

                86.94%

                78.57%

                0.04

                勃地酮

                97.78%

                94.07%

                0.12

                可的松

                103.53%

                107.69%

                0.02

                圖1 可的松標準溶液色譜圖(濃度為5 ng/mL)

                圖2 勃地酮、睪酮與黃體酮標準溶液色譜圖(濃度為5 ng/mL)

                圖3 血清樣品色譜圖(負模式)

                圖4 血清樣品色譜圖(正模式)

                圖5 血清加標樣色譜圖(負模式-加標濃度為5ng/mL)

                圖6 血清加標樣色譜圖(正模式-加標濃度為5ng/mL)

                訂貨信息表

                產品名稱

                規格/包裝

                訂貨號

                Cleanert SLE

                96深孔板,200mg/3mL

                HC2003-9

                96孔板負壓裝置

                96孔板匹配

                VM96

                Cleanert M96 生物樣品前處理儀

                96孔板匹配

                SPE-M96

                Cleanert V96 氮吹濃縮儀

                96孔板匹配

                NV96-G

                96孔接收板

                2mL/well,與96孔板匹配

                96SP2036-2

                Venusil ASB C18

                2.1*50mm,3μm,150 ?

                VS930502-0

                乙腈

                HPLC, 4*4L

                AH015-4

                LC-MS級,4*2.5L/

                LC365

                應用編號:YB10010

                在線客服

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